配制Western blot试剂配方

发布 2019-08-12 15:37:37 阅读 5592

`配制western-blot 所用相关试剂。

1. 30%聚丙烯酰胺 100ml (rt or 4°c避光保存)

29g丙烯酰胺。

1g bis-亚甲双丙烯酰胺

2. 10%sds 100ml rt

10g sds→100ml ddh2o 加热搅拌溶解。

3. buffers rt or 4°c

1.5m tris (ph: 8.8) 500ml (加tris 90.855g)

1.0m tris (ph: 6.8) 250ml (加tris 30.285g)

4. 10% 过硫酸胺(aps) 4°c 避光保质期一周。

0.1g aps →1ml ddh2o

5. tris-glycine (running buffer) 1l rt or 4°c

ddh2o 800ml 800ml 800ml

tris 15g30g3g

glycine 94g188g18.8g

10%sds 50ml100ml 10ml(1g)

加ddh2o→1000ml

6. 10× tris-glycine for transferring 1l rt or 4°c

tris : 30.26g

glycine: 144.1g

ddh2o: 1l

1× transferring buffer

10× tris-glycine 100ml (或 tris:3.026g glycine:14.41g)

methanol200ml

ddh2o700ml

7. tbs (washing buffer) rt or 4°c ( ph 7.6)

tris 48.4g 24.2g 2.42g

nacl 160g 80g8g

ddh2o 1000ml 1000ml 1000ml

8. buffer a: 用超纯水配制250ml储存在4°c冰箱中。

终浓度母液所需用量。

20mm hepes (ph 7.4) 1m(25ml:25*10-3*fw g5ml

2mm edta0.5m(5ml:2.5*10-3*fw g1ml

50mm -glycerophosphate fw:306.123.8265g

1mm dithiothreitol 1m (已分装,存于—20冰箱最低层铝盒) 0.25ml

1mm na3vo41m(2ml:0.368g0.25ml

1% triton20%(70ml12.5ml

10% glycerol25ml

备注:dithiothreitol(dtt)已经配制为1m,并储存于-20°c冰箱。

na3vo4(sodiium orthovanadate), 原装粉剂rt保存,在李志华最左边的抽屉里。

β-glycerophosphate粉剂在4°c冰箱李志华层托盘中。

9. protein inhibitors (fresh ******)

取1片溶解于2ml ddh2o, 并分装为200ul一支,-20°c保存。

用时 200ul储存液溶解于5ml buffer a中即用,若有剩余可存放于-20度下次用。

备注:片剂(complete,edta free)在李志华四度冰箱托盘中。

10.protein assay kit (bio-rad assay)(4度冰箱)

11. 5x laemmli buffer (sds gel- loading buffer)

componentsstockfor 10ml

250mm tris ph 6.6 1m tris, ph 6.6 2.5ml

100mm dtt1m dtt1ml

10%sds1g

bromphenol blue 0.5g in 10ml h2o 1ml

50% glycerol5ml

已经配制,并且分装成1ml,冻存于-20度,母液tris和溴芬兰分别配制10mldtt粉剂共有1g,共配制6.67ml,余5ml分装成1ml支,冻存到-20度中。

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