常用缓冲液及培养基配方

发布 2019-08-12 13:31:57 阅读 5754

1mol/l nacl

于室温保存(可在几年内保持稳定)

ctab抽提液。

2%(w/v)ctab(古立烷基三乙基溴化铵)

100mmol/l 8.0 *

1.4mol/l nacl

于室温保存(可在几年内保持稳定)

ctab/nacl 溶液(10% ctab/0.7mol/l nacl)

在80ml h2o中溶解4.1g nacl,缓慢加入10一ctab(十六烷基三乙基溴化铵),同时加热并搅拌。如果需要,可加热至65℃溶解。定容终体积至100ml.

ctab沉淀液。

1%(w/v) ctab

50mmol/l ph 8.0

10mmol/l edta, ph8.0

pbs缓冲液:

定容至5000ml, 调ph至7.2。

elisa包被液:

定容至1000ml,调ph至9.6。

elisa洗涤液(0.01m pbst):

5000ml pbs中加2.5ml吐温-20

显色液(底物溶液-邻苯二胺溶液):

ph5.0 磷酸盐-柠檬酸缓冲液:0.

1 m 柠檬酸(19.2 g/l) 24.3 ml、0.

2 m na2hpo4 (28.4 g/l) 25.7 ml、 临用时取上述溶液10 ml, 加邻苯二胺(opd)4 mg,溶解后加入30%h2o2 15 l;

终止液:2 m h2so4

te缓冲液(ph8.0):

高压灭菌。10% sds:

10g十二烷基硫酸钠溶于90ml水中,加热至68℃溶解,加几滴浓盐酸调ph至7.2,定容至100ml,过滤除菌。

50×tae缓冲液。

tris 242 g

冰醋酸 57.1 ml

0.5 mol/l edta(ph8.0) 100 ml

用水定容至1000 ml,用时稀释50倍。

5×tbe缓冲液:

加水定容至1000ml,0.5×使用。

6×dna上样缓冲液:

0.25%溴酚蓝*

0.25%二甲苯青ff*

30%甘油。

甲醛凝胶加样缓冲液(depc处理水配制):

50%甘油。

1mmol/l edta(ph8.0)

0.25溴酚蓝*

0.25二甲苯青ff*

适量溴化乙锭*

20×ssc:

溶解后用5n氢氧化钠调ph至7.0,定容至1000ml,高压灭菌保存。

预杂交液:6×ssc

5×denhardt试剂。

0.5% sds

100ug/ml经变性并断裂成片段的鲑精dna

5×甲醛凝胶电泳缓冲液:

0.1mol/l mops(ph7.0)*

40mmol/l乙酸钠。

5mmol/l edta(ph8.0)*

甲醛变性凝胶配方:

加入0.7 g琼脂糖到49.7 ml depc-h2o中,用煮沸法溶解琼脂糖,待溶液冷却至55℃同时加入7 ml 10×mops(0.

2 mol/l mops ph7.0, 20 m mol/l 乙酸钠,10 m mol/l edta ph8.0)电泳缓冲液和13.

3 ml甲醛,摇匀,制板待用。

0.5 mol/l磷酸缓冲液(ph 7.2)

134 g na2hpo4, 4 ml 85% h3po4,用水定容至1l。

探针标记中的逆转录终止液1×ten

40 m mol/l tris-cl (ph 7.5),1 m mol/l edta (ph 8.0),150 m mol/l nacl。

洗膜液ⅰ 2×ssc, 0.1%(m/v)sds

洗膜液ⅱ 0.1×ssc, 0.1%(m/v)sds

sds-page 电泳分析所用的试剂:

30%丙烯酰胺: 29g丙烯酰胺和1g n ,n ’亚甲基双丙烯酰胺,加入60ml ddh2o,完全溶解后定容至100ml,过滤,置棕色瓶中备用。

tris-甘氨酸电泳缓冲液: tris 3.00g,甘氨酸14.4g,sds 1g,调ph至8.3,用水定容至1l。

12%分离胶: ddh2o 3.3ml,30%丙烯酰胺4ml,tris-hcl(ph8.

8)2.5ml,10%sds 0.1ml,10%过硫酸铵0.

1ml,temed 0.006ml。

5%浓缩胶: ddh2o 1.4ml,30%丙烯酰胺0.

33ml,tris-hcl(ph6.6)0.25ml,10%sds0.

02ml,10%过硫酸铵0.02ml,temed 0.002ml。

考马斯亮蓝染色液: 乙醇450ml,冰醋酸100ml,ddh2o 450ml,考马斯亮蓝r-250 2.5g。

脱色液(1l): 乙醇450ml,冰醋酸100ml,ddh2o 450ml。

2×上样缓冲液: 100mmol/l tris-hcl(ph6.8),200mmol/l 二硫苏糖醇(dtt),4% sds,0.2%溴酚蓝,20%甘油。

蛋白纯化所需的缓冲液:

buffer b(ph 8.0):8m urea、100 mm nah2pomm tris-cl

buffer c(ph 6.3):8m urea、100 mm nah2pomm tris-cl

buffer d(ph 5.9):8m urea、100 mm nah2pomm tris-cl

buffer e(ph 4.5):8m urea、100 mm nah2pomm tris-cl

电洗脱缓冲液:

定容至1000ml

蛋白提取缓冲液:

电转移缓冲液:

tris-base 3.00g,甘氨酸14.4g,sds 1g,甲醇 200ml,调ph至8.3,用水定容至1l。

western blot所用试剂:

1×pbs(ph7.4):nacl 8 g,kcl 0.2 g,kh2po4 0.24 g,na2hpo4 1.44g,用蒸馏水溶解至1 l

1×pbst:5l 1×pbs 中加入2.5ml tween-20

封闭液:100ml pbs缓冲液中加入5克脱脂奶粉。

植物基本培养基溶液。

微量元素(1l)

有机(1l)

mss培养基。

msr(1l)

水稻转化用培养基。

水稻转化用激素和化合物的配制。

1) 2,4-d(1mg/ml):称取100mg 2,4-d置于小烧杯内,加少量无水乙醇使之完全溶解后,将水缓慢加入不停搅拌的2,4-d酒精溶液中,不可出现沉淀,定容至100ml,过滤除菌。

2) 6-ba (1mg/ml):称取100mg 6-ba置于小烧杯内,加少量1m koh溶解,慢慢加灭菌蒸馏水至100ml,过滤除菌,4℃保存。

3)naa(1mg/ml):称取100mg naa置于小烧杯内,用1m koh溶解,慢慢加灭菌蒸馏水至100ml,过滤除菌,4℃保存。